Kromatografi kolonları kuru doldurma (dry packing) yöntemiyle üç adımda nasıl doldurulur?

Kromatografi uygulamanız yeniden kullanılabilir cam kolonlara izin veriyorsa, bunları doğru şekilde doldurduğunuzdan ve yeniden doldurduğunuzdan emin olmanız gerekir.

Burada bir kolonun kuru doldurma sürecini açıklayacağım ve size kuru doldurma tekniğiyle doldurulmuş bir kolonun nasıl dengeye getirileceği hakkında ayrıntılı bilgiler vereceğim. Süreci görselleştirmenize yardımcı olacak ve yazıların arasında sıkıntıdan kurumanızı önleyecek bir resim bile ekledim.

Eşim ve ben, sahip olduğumuz plastik eşyaları ziyan etmeden yeniden kullanmaya çalışırız. Plastik poşetleri çöp veya alışveriş poşeti olarak, eski yoğurt ve dondurma kaplarını saklama kabı vb. olarak, plastik şişeleri ve kapakları bahçe işleri ve hobiler için yeniden kullanmaya çalışıyoruz. Anafikri anladınız. Hem bütçeniz hem de çevre için ideal bir yaklaşım.

Laboratuvarda ve kromatografide kullandığımız plastik miktarı da şaşırtıcıdır. Tek kullanımlık ürünler, sonuçların hatasız ve kontaminasyonsuz olmasını sağlamak için genellikle gereklidir. Ancak bazı durumlarda hem maliyet tasarrufu sağlayan hem de çevre dostu olan satın alma kararları vermek mümkündür.

Örneğin, kromatografi cam kolonlarının kullanıcılar tarafından yeninden doldurulması, daha az hassas olan bazı saflaştırmalar için uygun ve ekonomik bir çözümdür. Yeniden doldurmaya ne kadar zaman ayırdığınızı hesaba katmalı ve kolonun profesyonelce doldurulamaması riskinin de farkında olmalısınız, bu nedenle ayrıştırma verimliliği ve tekrarlanabilirlik düşebilir. Ama kendi kolonlarınızı kendiniz doldurmaya karar verdiyseniz, yol boyunca size yardım etmek için buradayım.

Bir cam kolonu doldurmanın iki yolu vardır, kuru veya sıvı doldurma (dry packing ve slurry packing). Bu blog yazısında, kromatografi sisteminizden mümkün olan en iyi sonuçları alabilmeniz için kuru doldurmanın nasıl çalıştığını size açıklamak istiyorum.

Sıkıştırılmış bir gaz kullanarak kuru doldurma hızlı ve kolay bir işlemdir, ancak doldurma yoğunluğu düşük olur. Bu nedenle bu yaklaşım, orta ila büyük boyutlu silika partikülleri (25-200 μm) için daha uygundur. Daha küçük partikülleriniz varsa, cam kolonu bir pompa aracılığıyla doldurmak için silika ve çözücüden oluşan bir bulamaç (slurry) kullanmalısınız. İlerideki bir blog yazısında size sıvı yükleme sürecini anlatacağım.

Kuru doldurma (dry packing) veya sıvı dolurma (slurry packing) teknikleri seçiminden bağımsız olarak doldurma işlemi üç aşamaya ayrılabilir:

  • Hazırlık
  • Doldurma
  • Sıkıştırma

Dolgu malzemelerini bir ayrıştırma kolonunda kurutmak için aşağıdaki ekipmanlara ihtiyacınız vardır:

  • Ayrıştırma kolonu
  • Dolum kabı
  • Silika
  • Azot silindiri
  • Huni

Hazırlık aşamasında, kolonu iyice temizlenene kadar yıkamanız ve tamamen kuruyuncaya kadar beklemeniz gerekir. Doldurma adımı için kolonu dikey olarak doldurma kabındaki vidayla birlikte sıkıştırmanız gerekir. Daha sonra silikayı bir huni yardımıyla sıkı olmayacak bir biçimde doldurmaya başlayabilirsiniz. Doldurma kabı, kolon hacminin en az %10’u fazla olacak şekilde silika ile doldurulmalıdır.

En önemlisi, kolona hiçbir zaman dokunmamalı veya herhangi bir titreşime neden olmamalısınız çünkü bu, parçacıkların kaçınılmaz olarak ayrılmasına ve kolonun işe yaramaz hale gelmesine neden olacaktır.

Sıkıştırma aşaması sırasında, azot silindirinden kolon boyunca bir tıslama duyulmayana kadar azot üflenir. Daha sonra azot silindirinin ana valfini kapatmalı ve basıncı tamamen boşaltmalısınız. Bu prosedür, azot hortumu çıkarıldığında kolon yatağının dağılmasını önlemek için çok önemlidir.
Kolon artık dengelenmeye hazırdır.

Kromatografi uygulamanız yeniden kullanılabilir cam kolonlara izin veriyorsa, bunları doğru şekilde doldurduğunuzdan ve yeniden doldurduğunuzdan emin olmanız gerekir.

Burada bir kolonun kuru doldurma sürecini açıklayacağım ve size kuru doldurma tekniğiyle doldurulmuş bir kolonun nasıl dengeye getirileceği hakkında ayrıntılı bilgiler vereceğim. Süreci görselleştirmenize yardımcı olacak ve yazıların arasında sıkıntıdan kurumanızı önleyecek bir resim bile ekledim.

Eşim ve ben, sahip olduğumuz plastik eşyaları ziyan etmeden yeniden kullanmaya çalışırız. Plastik poşetleri çöp veya alışveriş poşeti olarak, eski yoğurt ve dondurma kaplarını saklama kabı vb. olarak, plastik şişeleri ve kapakları bahçe işleri ve hobiler için yeniden kullanmaya çalışıyoruz. Anafikri anladınız. Hem bütçeniz hem de çevre için ideal bir yaklaşım.

Laboratuvarda ve kromatografide kullandığımız plastik miktarı da şaşırtıcıdır. Tek kullanımlık ürünler, sonuçların hatasız ve kontaminasyonsuz olmasını sağlamak için genellikle gereklidir. Ancak bazı durumlarda hem maliyet tasarrufu sağlayan hem de çevre dostu olan satın alma kararları vermek mümkündür.

Örneğin, kromatografi cam kolonlarının kullanıcılar tarafından yeninden doldurulması, daha az hassas olan bazı saflaştırmalar için uygun ve ekonomik bir çözümdür. Yeniden doldurmaya ne kadar zaman ayırdığınızı hesaba katmalı ve kolonun profesyonelce doldurulamaması riskinin de farkında olmalısınız, bu nedenle ayrıştırma verimliliği ve tekrarlanabilirlik düşebilir. Ama kendi kolonlarınızı kendiniz doldurmaya karar verdiyseniz, yol boyunca size yardım etmek için buradayım.

Bir cam kolonu doldurmanın iki yolu vardır, kuru veya sıvı doldurma (dry packing ve slurry packing). Bu blog yazısında, kromatografi sisteminizden mümkün olan en iyi sonuçları alabilmeniz için kuru doldurmanın nasıl çalıştığını size açıklamak istiyorum.

Sıkıştırılmış bir gaz kullanarak kuru doldurma hızlı ve kolay bir işlemdir, ancak doldurma yoğunluğu düşük olur. Bu nedenle bu yaklaşım, orta ila büyük boyutlu silika partikülleri (25-200 μm) için daha uygundur. Daha küçük partikülleriniz varsa, cam kolonu bir pompa aracılığıyla doldurmak için silika ve çözücüden oluşan bir bulamaç (slurry) kullanmalısınız. İlerideki bir blog yazısında size sıvı yükleme sürecini anlatacağım.

Kuru doldurma (dry packing) veya sıvı dolurma (slurry packing) teknikleri seçiminden bağımsız olarak doldurma işlemi üç aşamaya ayrılabilir:

  • Hazırlık
  • Doldurma
  • Sıkıştırma

Dolgu malzemelerini bir ayrıştırma kolonunda kurutmak için aşağıdaki ekipmanlara ihtiyacınız vardır:

  • Ayrıştırma kolonu
  • Dolum kabı
  • Silika
  • Azot silindiri
  • Huni

Hazırlık aşamasında, kolonu iyice temizlenene kadar yıkamanız ve tamamen kuruyuncaya kadar beklemeniz gerekir. Doldurma adımı için kolonu dikey olarak doldurma kabındaki vidayla birlikte sıkıştırmanız gerekir. Daha sonra silikayı bir huni yardımıyla sıkı olmayacak bir biçimde doldurmaya başlayabilirsiniz. Doldurma kabı, kolon hacminin en az %10’u fazla olacak şekilde silika ile doldurulmalıdır.

En önemlisi, kolona hiçbir zaman dokunmamalı veya herhangi bir titreşime neden olmamalısınız çünkü bu, parçacıkların kaçınılmaz olarak ayrılmasına ve kolonun işe yaramaz hale gelmesine neden olacaktır.

Sıkıştırma aşaması sırasında, azot silindirinden kolon boyunca bir tıslama duyulmayana kadar azot üflenir. Daha sonra azot silindirinin ana valfini kapatmalı ve basıncı tamamen boşaltmalısınız. Bu prosedür, azot hortumu çıkarıldığında kolon yatağının dağılmasını önlemek için çok önemlidir.
Kolon artık dengelenmeye hazırdır.

Kuru doldurulan bir kolon nasıl dengeye getirilir?

Peki, dengeleme işlemini doğrudan ayrıştırma için gerekli olan çözücü ile yapmanız gerekir. Yeni doldurulmuş bir kolondan ilk 100 ila 200 ml sıvının atılmasını ve ancak o zaman çözücünün dolaştırılmasını tavsiye ediyorum. Bu ihtiyatlı adım, yıkanmış ince silika jel parçacıklarının pompaya girmesini önler. Kolondan hava çıkışı durduğunda ve dedektörün taban çizgisi stabil kaldığında, ayrıştırma işlemine devam edebilirsiniz.
Kolon bakımı, doldurma, yükleme ve depolama hakkında daha fazla bilgi için ücretsiz Chromapedia İkinci Sayı: Sarf Malzemeleri ve Numune Yükleme‘yi inceleyebilirsiniz.

Sanıyorum artık kendi cam kolonlarınızı kuru doldurma yöntemiyle doldurmak için hazırsınız. Bir sonraki gönderiyi beklerken daha fazla bilgi edinmek isterseniz, sabit faz için silika dışında başka hangi seçeneklere sahip olduğunuzu öğrenmek için daha önceki bir blog yazımı inceleyebilirsiniz. Umarım bu yazı sizin için çok kuru kalmamıştır, eğer öyleyse takipte kalın, bir sonraki kromatografi yazısı kesinlikle daha ıslak olacak.

Bir dahaki sefere kadar,

Bart Denoulet

Kaynak: https://www.barts-blog.net/dry-packing-of-a-chromatography-column-in-three-steps/