Mikrodalga Destekli Hidroliz Numune Hazırlama Yoluyla Küçük Numune Miktarlarında (<50 mg) Gıda ve Yem Numunelerinde Amino Asit Analizi

Milestone ETHOS X sistemini kullanarak numunelerinizde amino asit tayini için yüksek kaliteli ve hızlı numune hazırlama.

Özet

Bu Uygulama Metodu’nda açıklanan prosedür, gıda ve yemlerdeki amino asitlerin belirlenmesi için bir metot sunmaktadır. Amino asitler çok hassas olduğu için bu belirleme karmaşık bir süreç olabilir ve bu amaçla hedef amino asitlere bağlı olarak farklı numune hazırlama yöntemleri vardır. Hepsinin ortak noktası, mikrodalga enerjisi ve kapalı kap teknolojisinin kombinasyonunun numune hazırlama süresini önemli ölçüde azalttığı hidroliz adımıdır. Milestone ETHOS X sistemi, rotor tabanlı mikrodalga teknolojisi sayesinde verimlilik, güvenilirlik ve yüksek tekrarlanabilirlik sağlayarak aynı anda 36 numuneye kadar işlem yapılmasına olanak tanır.

Analiz

Bu uygulama notunda asit protein hidrolizi için bir metot bildirilmektedir.

• Milestone ETHOS X
• ATC sıcaklık kontrolü
• Vakum pompası (Milestone combiVAC)
• PHK05L veya PHK1L Protein hidroliz reaktörü:
• 8, 25 veya 36 pozisyonlu raf
• 8, 25 pozisyonları için 3 mL’lik kuvars şişeler raf
• 1 mL HPLC cam şişeleri
• Azot gazı tüpü, saflık seviyesi 4.7 veya daha yüksek

Şekil 1 – Milestone ETHOS X ve PHK05L reaktörü

Numuneler ve Reaktifler

Bu yöntem için kullanılabilecek maksimum numune miktarı 50 mg’a kadardır. Numunenin kütlesine bağlı olarak kullanılacak reaktiflerin hacminin değiştiğine dikkat edin.

• Asit hidrolizi için 6 N HCl,

Prosedür

• 1. Numuneyi doğrudan kuvars şişelere veya HPLC şişelerine tartın.
• 2. Reaktör kabını aşağıdakilerle doldurun:
• a. PHK05L: 30 mL HCl 6 N
• b. PHK1L: 120 mL HCl 6 N
• 3. HPLC şişeleri kullanılıyorsa, kapaklar aşağıdaki gibi olmalıdır
• 4. Şişeleri reaktörün içine yerleştirin (uygun PTFE rafı ile).
• 5. Reaktörü kapatın ve Azot silindirine ve Vakum pompasına bağlı üç yollu vanayı açıp kapatarak reaktörün içinde inert bir ortam oluşturun (daha fazla ayrıntı PHK kullanım kılavuzunda mevcuttur).
• 6. Termal olarak parçalanabilen amino asitlerin belirlenmesi için: Met, Ser, Thr, Tyr, Phe ve Arg, Tablo 1’de açıklanan Mikrodalga programını çalıştırın.
• 7. Tablo 2’de açıklanan yöntem alifatik amino asitler arasındaki bağlantıları tamamen bozmak için tasarlanmıştır.

Tablo 1 – Met, Ser, Thr, Tyr, Phe ve Arg için mikrodalga hidroliz yöntemi. Çalışma belirleme

Tablo 2 – Alifatik amino asitler arasındaki bağları tamamen parçalamak için mikrodalga hidroliz yöntemi

• 8. Soğuduktan sonra çözeltileri geri kazanın ve katı parçacıkları çıkarın.
• 9. Hidrolizat türevlendirme adımı ve Gaz kromatografisi veya Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) ile analiz için hazırdır.

Referans: Milestone SRL