Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir

Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir?

Pik bölünmesi (peak splitting) ve pik omuzlanması (peak fronting) yüzünden geceleri gözünüze uyku girmiyor mu?

Mükemmel kromatogram piklerinin yalnızca güzel birer hayal olduğunu mu düşünüyorsunuz? Aslında onları gerçekten elde edebilirsiniz! Kromatogramınızı bozabilecek birkaç çirkin pik türünü ele almanın zamanı geldi. Talihsiz birer kromatogram fenomeni olan pik omuzlanması (peak fronting) ve pik bölünmesi (peak splitting) durumlarından güzel pikler elde etmek üzere nasıl kurtulacağınızı öğrenmek için okumaya devam edin.


 
Eşim geçen gece avazı çıktığı kadar bağırarak soğuk terler içinde uyandı. Kadıncağız korkunç bir kabus görmüş. Yalnızca kemiklerden ve atan bir kalpten oluşan bir tavuk bahçede ordan oraya koşuşturuyormuş. Ben de kendi kabuslarımı anlatarak onu sakinleştirmeye çalıştım, ama işe yaramadı. Her nasılsa bunu kemikten yapılmış tavuğu kadar korkunç bulmadı.













Tamam tamam, sanırım bu biçimsiz ve çirkin pikler sadece kromatografiye özgü korkunçluklar. Ama onları benim kadar korkunç buluyorsanız ve bu kötü rüyaların gerçeğe dönüşmesini istemiyorsanız, size bu konuda yardımcı olup olamayacağımı görmek için okumaya devam edin.

Son kromatografi postunda kromatogramlardaki pik kuyruklanması (peak tailing) ve bunun önüne nasıl geçilebileceğinden bahsetmiştim. Ama o zaman da bahsettiğim gibi, pik simetrisi arayışınızda savaşmanız gereken başka kötü etkiler de var. Bu yazıda, pik omuzlanması ve pik bölünmesinin nedenlerine ve çözümlerine odaklanmak istiyorum.

Kromatografide pik omuzlanması ile başlayalım, ne dersiniz?

Pik omuzlanması pik kuyruklanmasına göre daha seyrek olur, ancak meydana geldiğinde aşağıdaki şekildeki gibi görünür:



 










Pik omuzlanmasının nedenlerinden biri kolonun aşırı yüklenmesidir.

Bir kolonun belirli bir maksimum numune kapasitesi vardır. Bu maksimum değer aşılırsa, ilave moleküller sabit ve mobil faz arasında ayrışamaz. Bu nedenle, kolondan daha hızlı elüsyon olur ve pik omuzlanmasına neden olabilirler. Pik omuzlanmasını azaltmak veya ortadan kaldırmak için kolona yüklediğiniz numune miktarını azaltmayı deneyebilirsiniz.

Pik omuzlanmasının bir başka nedeni, numune solventi ile mobil faz arasındaki uyumsuzluktur. Bu sorunun üstesinden gelmek için numuneyi mobil fazda çözmeyi deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, katı bir yükleme yaklaşımı kullanarak numuneyi kromatografi sisteminize dahil edebilirsiniz, çünkü bu yöntem numune çözücü gerektirmez. Numune yükleme teknikleri hakkında daha fazla bilgi için ücretsiz Chromapedia Vol 2 kılavuzunu inceleyebilirsiniz.

Artık pik omuzlanmasını anladığımıza göre üçüncü ve son bir kabus senaryosuna bakalım: pik bölünmesi. Pik bölünmesi, kromatografi sistemi tarafından püskürtüldüğünde aşağıdaki gibi görünen biçimsiz piklerdir:












 
Kromatogramınızda pik bölünmesi fark ettiğinizde, öncelikle pik bölünmesini sadece bir ya da iki pikte mi yoksa neredeyse tüm piklerde mi gözlemlediğinizi kontrol etmelisiniz.

Yalnızca tek bir pik etkilenmişse, pik bölünmesi muhtemelen kimya ve gerçek separasyon ile ilgili bir problemden kaynaklanmaktadır. Olası bir çözüm, mobil faz koşullarını optimize etmeniz olacaktır. Bu, pik bölünmesini düzeltmezse, ayırmayı iyileştirmek için başka bir sabit faz seçmeyi deneyin. Mobil ve sabit fazları nasıl optimize edeceğinize dair birkaç fikre daha önceki yazılarımdan ulaşabilirsiniz.

Piklerinizin çoğu veya tümü etkilenmişse, pik bölünmesi muhtemelen kolonla ilgili sorunlardan kaynaklanmaktadır. Örneğin, kolonun girişinde bir boşluğun varlığı veya paketleme yatağında kanal olması, pik bölünmesine neden olabilir. Önceden paketlenmiş bir kartuş kullanıyorsanız, bu sorunu çözmenin tek yolu yeni bir kartuş kullanmaktır. Daha önce de yazdığım gibi, bu durum ihtiyaçlarınız için en uygun kartuşu kullanıp kullanmadığınızı kontrol etmek için iyi bir zaman olabilir. Karar verme sürecinize yardımcı olmak için geliştirdiğimiz kartuş seçim aracını inceleyebilirsiniz.

Kısmen tıkalı giriş fritleri de pik bölünmesine neden olabilir. Bu etkiyi ortadan kaldırmak için kolona yüklemeden önce numunelerinizi filtreden geçirmeyi deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, pik bölünmesini önlemek için bir katı yükleme enjeksiyon tekniği kullanabilirsiniz.

Umarım bu yazı, kromatografi kullanıcılarının kabusu olan pik bölünmesi ve pik omuzlaması için bir düş kapanı olabilir, böylece bu etkileri kromatogramlarınızdan ve kötü rüyalarınızdan çıkarmış olursunuz.

Sizi bütün gece uyanık tutan başka kromatografi problemleri var mı? Bu konuda size yardımcı olmamız için bizimle iletişime geçebilirsiniz.

Bir dahaki sefere kadar,
 
Bart  Denoulet

 
Kaynak: https://www.barts-blog.net/are-peak-splitting-and-peak-fronting-effects-keeping-you-up-at-night/



 

Takip Et

Facebook
Twitter
LinkedIn
Instagram
YouTube

Paylaş

Facebook
Twitter
LinkedIn

Bunları da beğenebilirsiniz!

Farmasötik Nanoteknoloji Fırsatlar ve Zorluklar

Farmasötik Nanoteknoloji: Fırsatlar ve Zorluklar

Farmasötik nanoteknoloji, ilaç taşıyıcı ve/veya teşhis araçları olarak nano ölçekli malzemelerin kullanılmasını içeren ve heyecan verici bir hızla gelişen bir tıp bilimi dalıdır. İlaç taşıyıcı araçlar olarak nano dağıtım sistemleri, belirli ilaçların belirli organ ya da dokulara özel olarak hedeflenen iletimini geliştirmek için kullanılabilir. İlaç taşıyıcı sistemler olarak nanopartiküllerin kullanılması genel olarak yan etkilerde ciddi oranda azalma ve buna eşlik eden ilaç etkinliğinin gelişmesini sağlar.
  • 30 Kas 2021

Devamı...

Pipetler Hakkında Bilmeniz Gereken Her Şey

Pipetler Hakkında Bilmeniz Gereken Her Şey

Pipetler bilim insanları için temel laboratuvar araçlarıdır ancak çok sayıda seçenek mevcut olduğu için hangisini seçeceğinize karar vermek kafa karışıklığı yaratabilir. Çeşitli pipet türleri arasındaki farklar nelerdir? Yeni bir pipet satın alırken hangi özelliklere dikkat edilir? Pipetler doğru bir şekilde nasıl kullanılır ve uzun bir süre boyunca güvenilir kalması nasıl sağlanır? Bu kapsamlı makalede tüm bu soruların ve daha fazlasının cevabını bulabilirsiniz.
  • 18 Kas 2021

Devamı...

Antipsikotik İlaçlar İçin Rutin Analizlerin Geliştirilmesi

Antipsikotik İlaçlar İçin Rutin Analizlerin Geliştirilmesi

Araştırmacılar, terapötik ilaç izleme ve adli tıp uygulamalarında plazmadaki 38 antipsikotik ve metaboliti ölçmek için yeni bir LC-MS/MS metodunu doğruladı.
  • 3 Kas 2021

Devamı...

mRNA Teknolojisi ve Lipit Nanopartiküller ile İlgili Son Gelişmeler

mRNA Teknolojisi ve Lipit Nanopartiküller ile İlgili Son Gelişmeler

COVID-19 maalesef bir yılı aşkın bir süredir hayatımızda yer alıyor. Bu süre zarfında en önemli başarılardan biri, tıp biliminin kısa sürede sadece bir tane değil, birkaç tane yüksek etkili aşı üretme becerisidir.

Peki, COVID-19 aşılarını bir yıldan kısa sürede geliştirmek ve önceki pandemi aşılarından daha yüksek etkinlik sağlamak nasıl mümkün olabildi?
  • 25 Eki 2021

Devamı...

Hiçbir Paylaşımı Kaçırmayın



İletişim Formu

Son paylaşımlar

Farmasötik Nanoteknoloji Fırsatlar ve Zorluklar

Farmasötik Nanoteknoloji: Fırsatlar ve Zorluklar

Pipetler Hakkında Bilmeniz Gereken Her Şey

Pipetler Hakkında Bilmeniz Gereken Her Şey

Antipsikotik İlaçlar İçin Rutin Analizlerin Geliştirilmesi

Antipsikotik İlaçlar İçin Rutin Analizlerin Geliştirilmesi

mRNA Teknolojisi ve Lipit Nanopartiküller ile İlgili Son Gelişmeler

mRNA Teknolojisi ve Lipit Nanopartiküller ile İlgili Son Gelişmeler

Kullanılmış Maskeler Mikroplastik Riski Oluşturuyor

Kullanılmış Maskeler Mikroplastik Riski Oluşturuyor

Nükleik Asitler Nasıl Saflaştırılır

Nükleik Asitler Nasıl Saflaştırılır?

Nükleik Asitlerin Saflık ve Konsantrasyonunun Belirlenmesi

Nükleik Asitlerin Saflık ve Konsantrasyonunun Belirlenmesi

Bir PCR Laboratuvarı Nasıl Kurulur

Bir PCR Laboratuvarı Nasıl Kurulur?

Nükleik Asit Ekstraksiyonu İçin Gerekli Ekipmanlar Nelerdir

Nükleik Asit Ekstraksiyonu İçin Gerekli Ekipmanlar Nelerdir?

Protein Aktivitesinin Glikozilasyon Yoluyla Modifikasyonunun COVID19un Şiddetini Tahmin Etmek için Kullanılması

Protein Aktivitesinin Glikozilasyon Yoluyla Modifikasyonunun COVID-19’un Şiddetini Tahmin Etmek için Kullanılması

Biyofarmasötikler Nasıl Üretilir

Biyofarmasötikler Nasıl Üretilir?

Hücre Kültürü Çalışmalarında Saf Suyun Önemi Nedir

Hücre Kültürü Çalışmalarında Saf Suyun Önemi Nedir?

Doğal Bileşiklerin Saflaştırılması İçin Tavsiyeler

Doğal Bileşiklerin Saflaştırılması İçin Tavsiyeler

Antibiyotik Direncine Karşı Mücadelede Otomatik Pipetleme Robotlarının Kullanımı

Antibiyotik Direncine Karşı Mücadelede Otomatik Pipetleme Robotlarının Kullanımı

Covid19 Tanı Testlerinde Hücre Parçalanmasının Rolü

Covid-19 Tanı Testlerinde Hücre Parçalanmasının Rolü

ICPMS ve ICPOES analizlerinde saf suyun önemi nedir

ICP-MS ve ICP-OES analizlerinde saf suyun önemi nedir?

Flash kromatografi sistemlerinin bakımı nasıl yapılır

Flash kromatografi sistemlerinin bakımı nasıl yapılır?

Elektronik Pipetlerin Mikrobiyal Evrim Araştırmalarında Tarama için Kullanılması

Elektronik Pipetlerin Mikrobiyal Evrim Araştırmalarında Tarama için Kullanılması

Nanoemülsiyonlar CBD Yağını İçeceklere Karıştırmak

Nanoemülsiyonlar: CBD Yağını İçeceklere Karıştırmak

Laboratuvar için Farklı Saf Su Tipleri Hakkında Bilmeniz Gerekenler

Laboratuvar için Farklı Saf Su Tipleri Hakkında Bilmeniz Gerekenler

2021 için Kromatografi ve Rotary Evaporasyona Yönelik Kristal Küre Tahminleri

2021 için Kromatografi ve Rotary Evaporasyona Yönelik Kristal Küre Tahminleri

INTEGRA VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipetler Yardımıyla Yeni Nesil Bilim İnsanlarını Eğitmek

INTEGRA VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipetler Yardımıyla Yeni Nesil Bilim İnsanlarını Eğitmek

CBD Yağı Bazlı Nanoemülsiyonlar Üretmek için Kullanılan Yöntemler

CBD Yağı Bazlı Nanoemülsiyonlar Üretmek için Kullanılan Yöntemler

Hepatit B Enfeksiyonunu Önlemek için DNA Aşılarının Araştırılması

Hepatit B Enfeksiyonunu Önlemek için DNA Aşılarının Araştırılması

Gelin bu olağandışı yılı sıra dışı bir blog yazısıyla noktalayalım

Gelin bu olağandışı yılı sıra dışı bir blog yazısıyla noktalayalım!

Doğru Rezervuar ile Değerli Reaktiflerinizi Koruyun ve Tasarruf Edin

Doğru Rezervuar ile Değerli Reaktiflerinizi Koruyun ve Tasarruf Edin

Tanı Testleri için Kaliteli Enzimler Nasıl Oluşturulur

Tanı Testleri için Kaliteli Enzimler Nasıl Oluşturulur?

Papatya Çayındaki Ağır Metallerin Tespit Edilmesi

Papatya Çayındaki Ağır Metallerin Tespit Edilmesi

INTEGRA çözümleri tanı test ve araştırmalarını nasıl hızlandırıyor

INTEGRA çözümleri tanı test ve araştırmalarını nasıl hızlandırıyor?

Kararlı ve steril Propofol nasıl üretilir

Kararlı ve steril Propofol nasıl üretilir?

Kromatografi kolonları kuru doldurma dry packing yöntemiyle üç adımda nasıl doldurulur

Kromatografi kolonları kuru doldurma (dry packing) yöntemiyle üç adımda nasıl doldurulur?

Gıda Ambalajları için Yeşil Plastiklerin Geliştirilmesi

Gıda Ambalajları için Yeşil Plastiklerin Geliştirilmesi

VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipet Basel Üniversitesinde immünoloji araştırmalarını nasıl hızlandırıyor

VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipet Basel Üniversitesi'nde immünoloji araştırmalarını nasıl hızlandırıyor?

Hücre parçalanması nedir ve bunun için hangi metotlar kullanılır

Hücre parçalanması nedir ve bunun için hangi metotlar kullanılır?

RFID teknolojisi kromatografi analizlerine nasıl yardımcı olur

RFID teknolojisi kromatografi analizlerine nasıl yardımcı olur?

Biyomimikri ArGeye Giden Doğal Yol

Biyomimikri: Ar-Ge'ye Giden Doğal Yol

Elektronik Pipet Kullanmak için 5 Neden

Elektronik Pipet Kullanmak için 5 Neden

Aşı Geliştirme Çalışmalarında Microfluidizer Teknolojisi Nasıl Kullanılır

Aşı Geliştirme Çalışmalarında Microfluidizer Teknolojisi Nasıl Kullanılır?

Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir

Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir?

Virüslerin Saptanması ve Karakterizasyonunda HPLCnin Rolü Nedir

Virüslerin Saptanması ve Karakterizasyonunda HPLC'nin Rolü Nedir?

Kozmetik ürünlerin etiketlerindeki maddeler nasıl elde edilir

Kozmetik ürünlerin etiketlerindeki maddeler nasıl elde edilir?

Aşı Taşıyıcı Sistemlerin Tasarımında Lipid Nanopartiküllerin Kullanımı

Aşı Taşıyıcı Sistemlerin Tasarımında Lipid Nanopartiküllerin Kullanımı

Microfluidizer İşlemcileri Aşı Üretimine Destek İçin Nasıl Kullanılır

Microfluidizer İşlemcileri Aşı Üretimine Destek İçin Nasıl Kullanılır?

COVID19 için PCR işlemlerinizi hızlandırın

COVID-19 için PCR işlemlerinizi hızlandırın

Kahvenizin içinde ne var

Kahvenizin içinde ne var?

Etiketler

HPLC   kromatografi   flash   preparatif   mobil faz   

sabit faz   kartuş   kolon   saflaştırma   Büchi   

pik bölünmesi   pik omuzlanması   

Makaledeki ürünler

Pure C850 FlashPrep Kromatografi Sistemi

Pure C-850 FlashPrep Kromatografi Sistemi