Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir

Kromatografi analizlerinde pik bölünmesi ve pik omuzlanması nasıl önlenir?

Pik bölünmesi (peak splitting) ve pik omuzlanması (peak fronting) yüzünden geceleri gözünüze uyku girmiyor mu?

Mükemmel kromatogram piklerinin yalnızca güzel birer hayal olduğunu mu düşünüyorsunuz? Aslında onları gerçekten elde edebilirsiniz! Kromatogramınızı bozabilecek birkaç çirkin pik türünü ele almanın zamanı geldi. Talihsiz birer kromatogram fenomeni olan pik omuzlanması (peak fronting) ve pik bölünmesi (peak splitting) durumlarından güzel pikler elde etmek üzere nasıl kurtulacağınızı öğrenmek için okumaya devam edin.


 
Eşim geçen gece avazı çıktığı kadar bağırarak soğuk terler içinde uyandı. Kadıncağız korkunç bir kabus görmüş. Yalnızca kemiklerden ve atan bir kalpten oluşan bir tavuk bahçede ordan oraya koşuşturuyormuş. Ben de kendi kabuslarımı anlatarak onu sakinleştirmeye çalıştım, ama işe yaramadı. Her nasılsa bunu kemikten yapılmış tavuğu kadar korkunç bulmadı.

















Tamam tamam, sanırım bu biçimsiz ve çirkin pikler sadece kromatografiye özgü korkunçluklar. Ama onları benim kadar korkunç buluyorsanız ve bu kötü rüyaların gerçeğe dönüşmesini istemiyorsanız, size bu konuda yardımcı olup olamayacağımı görmek için okumaya devam edin.

Son kromatografi postunda kromatogramlardaki pik kuyruklanması (peak tailing) ve bunun önüne nasıl geçilebileceğinden bahsetmiştim. Ama o zaman da bahsettiğim gibi, pik simetrisi arayışınızda savaşmanız gereken başka kötü etkiler de var. Bu yazıda, pik omuzlanması ve pik bölünmesinin nedenlerine ve çözümlerine odaklanmak istiyorum.

Kromatografide pik omuzlanması ile başlayalım, ne dersiniz?

Pik omuzlanması pik kuyruklanmasına göre daha seyrek olur, ancak meydana geldiğinde aşağıdaki şekildeki gibi görünür:
 
















Pik omuzlanmasının nedenlerinden biri kolonun aşırı yüklenmesidir.

Bir kolonun belirli bir maksimum numune kapasitesi vardır. Bu maksimum değer aşılırsa, ilave moleküller sabit ve mobil faz arasında ayrışamaz. Bu nedenle, kolondan daha hızlı elüsyon olur ve pik omuzlanmasına neden olabilirler. Pik omuzlanmasını azaltmak veya ortadan kaldırmak için kolona yüklediğiniz numune miktarını azaltmayı deneyebilirsiniz.

Pik omuzlanmasının bir başka nedeni, numune solventi ile mobil faz arasındaki uyumsuzluktur. Bu sorunun üstesinden gelmek için numuneyi mobil fazda çözmeyi deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, katı bir yükleme yaklaşımı kullanarak numuneyi kromatografi sisteminize dahil edebilirsiniz, çünkü bu yöntem numune çözücü gerektirmez. Numune yükleme teknikleri hakkında daha fazla bilgi için ücretsiz Chromapedia Vol 2 kılavuzunu inceleyebilirsiniz.

Artık pik omuzlanmasını anladığımıza göre üçüncü ve son bir kabus senaryosuna bakalım: pik bölünmesi. Pik bölünmesi, kromatografi sistemi tarafından püskürtüldüğünde aşağıdaki gibi görünen biçimsiz piklerdir:


















 
Kromatogramınızda pik bölünmesi fark ettiğinizde, öncelikle pik bölünmesini sadece bir ya da iki pikte mi yoksa neredeyse tüm piklerde mi gözlemlediğinizi kontrol etmelisiniz.

Yalnızca tek bir pik etkilenmişse, pik bölünmesi muhtemelen kimya ve gerçek separasyon ile ilgili bir problemden kaynaklanmaktadır. Olası bir çözüm, mobil faz koşullarını optimize etmeniz olacaktır. Bu, pik bölünmesini düzeltmezse, ayırmayı iyileştirmek için başka bir sabit faz seçmeyi deneyin. Mobil ve sabit fazları nasıl optimize edeceğinize dair birkaç fikre daha önceki yazılarımdan ulaşabilirsiniz.

Piklerinizin çoğu veya tümü etkilenmişse, pik bölünmesi muhtemelen kolonla ilgili sorunlardan kaynaklanmaktadır. Örneğin, kolonun girişinde bir boşluğun varlığı veya paketleme yatağında kanal olması, pik bölünmesine neden olabilir. Önceden paketlenmiş bir kartuş kullanıyorsanız, bu sorunu çözmenin tek yolu yeni bir kartuş kullanmaktır. Daha önce de yazdığım gibi, bu durum ihtiyaçlarınız için en uygun kartuşu kullanıp kullanmadığınızı kontrol etmek için iyi bir zaman olabilir. Karar verme sürecinize yardımcı olmak için geliştirdiğimiz kartuş seçim aracını inceleyebilirsiniz.

Kısmen tıkalı giriş fritleri de pik bölünmesine neden olabilir. Bu etkiyi ortadan kaldırmak için kolona yüklemeden önce numunelerinizi filtreden geçirmeyi deneyebilirsiniz. Alternatif olarak, pik bölünmesini önlemek için bir katı yükleme enjeksiyon tekniği kullanabilirsiniz.

Umarım bu yazı, kromatografi kullanıcılarının kabusu olan pik bölünmesi ve pik omuzlaması için bir düş kapanı olabilir, böylece bu etkileri kromatogramlarınızdan ve kötü rüyalarınızdan çıkarmış olursunuz.

Sizi bütün gece uyanık tutan başka kromatografi problemleri var mı? Bu konuda size yardımcı olmamız için bizimle iletişime geçebilirsiniz.

Bir dahaki sefere kadar,
 
Bart  Denoulet
 
Kaynak: https://www.barts-blog.net/are-peak-splitting-and-peak-fronting-effects-keeping-you-up-at-night/

Takip Et

Facebook
Twitter
linkedin
Instagram
YouTube

Paylaş

Facebook
Twitter
linkedin

Bunları da beğenebilirsiniz!

VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipet Basel Üniversitesinde immünoloji araştırmalarını nasıl hızlandırıyor

VOYAGER Aralıkları Ayarlanabilir Elektronik Pipet Basel Üniversitesi'nde immünoloji araştırmalarını nasıl hızlandırıyor?

Basel Üniversitesi Biyotıp Bölümü, nörobiyoloji, enfeksiyon ve bağışıklık, kanser, kök hücre biyolojisi ve rejeneratif tıp gibi bir dizi önemli araştırma alanında uzmanlaşmış durumda. 
  • 22 Eyl 2020

Devamı...

Hücre parçalanması nedir ve bunun için hangi metotlar kullanılır

Hücre parçalanması nedir ve bunun için hangi metotlar kullanılır?

Bu blog yazısında, Microfluidizer Teknolojisi için önemli bir uygulama olan hücre parçalanması ile ilgili bazı temel bilgileri ele alıyoruz.
  • 15 Eyl 2020

Devamı...

RFID teknolojisi kromatografi analizlerine nasıl yardımcı olur

RFID teknolojisi kromatografi analizlerine nasıl yardımcı olur?

Birçoğumuz aynı anda 20 deneyi birden yapmak, meslektaşlarımızla laboratuvar ekipmanlarını paylaşmak ve numunelerin karışması gibi felaketlerle başa çıkmak durumundayız. Ancak her gün yaşanan bu streslerle başa çıkmanıza yardımcı olacak yollar var. 
  • 8 Eyl 2020

Devamı...

Biyomimikri ArGeye Giden Doğal Yol

Biyomimikri: Ar-Ge'ye Giden Doğal Yol

Bilim insanları ve mühendisler, basitten karmaşığa çok çeşitli sorunlara çözüm bulmak için genellikle doğaya bakarlar. 
  • 1 Eyl 2020

Devamı...

Elektronik Pipet Kullanmak için 5 Neden

Elektronik Pipet Kullanmak için 5 Neden

Manuel pipetler laboratuvarlar için harika araçlardır, ancak elektronik pipetlerin ne kadar faydalı olabileceğini gerçekten biliyor musunuz?
  • 25 Ağu 2020

Devamı...

Aşı Geliştirme Çalışmalarında Microfluidizer Teknolojisi Nasıl Kullanılır

Aşı Geliştirme Çalışmalarında Microfluidizer Teknolojisi Nasıl Kullanılır?

Aşı adjuvanları, lipid nanopartiküller (LNP'ler) ve protein antijenlerinin üretimi için hücre parçalanması Microfluidizer işlemcileri kullanılarak gerçekleştirilen üç temel ve iyi bilinen aşı uygulamasıdır.
  • 18 Ağu 2020

Devamı...

Virüslerin Saptanması ve Karakterizasyonunda HPLCnin Rolü Nedir

Virüslerin Saptanması ve Karakterizasyonunda HPLC'nin Rolü Nedir?

HPLC, aşıların geliştirilmesinde viral partiküllerin miktarının belirlenmesi ve karakterizasyonunun yanında hastalığın epidemiyolojisine bakarken farklı viral serotiplere karşılık gelen proteinlerin tanımlanması ve karakterizasyonu için de yaygın olarak kullanılan bir metottur. Bu teknikler nasıl çalışır? Bu tekniklerin, kullanılan en önemli çözücü olan saf su düşünüldüğünde, mümkün olan en doğru sonuçları vermelerini nasıl sağlayabiliriz?
  • 4 Ağu 2020

Devamı...

Kozmetik ürünlerin etiketlerindeki maddeler nasıl elde edilir

Kozmetik ürünlerin etiketlerindeki maddeler nasıl elde edilir?

Hiç fondöteninizin temel yapısını merak ettiniz mi? Ya da organik el kreminizin içindekiler etiketindeki maddeleri?
  • 7 Tem 2020

Devamı...

Aşı Taşıyıcı Sistemlerin Tasarımında Lipid Nanopartiküllerin Kullanımı

Aşı Taşıyıcı Sistemlerin Tasarımında Lipid Nanopartiküllerin Kullanımı

Lipid Nanopartiküllerin iletim sistemleri üzerindeki etkilerine ve bir iletim sistemi olarak LNP'lerin faydalarına genel bir bakış...
 
  • 8 Haz 2020

Devamı...

Microfluidizer İşlemcileri Aşı Üretimine Destek İçin Nasıl Kullanılır

Microfluidizer İşlemcileri Aşı Üretimine Destek İçin Nasıl Kullanılır?

En yaygın olarak kullanılan adjuvanların bazıları su içindeki yağ nano emülsiyonlarıdır.  Bu adjuvanlar, pandemik aşılar için idealdir çünkü antikor tepkileri iyi anlaşılmış ve güvenlidirler.
  • 30 Mar 2020

Devamı...

COVID19 için PCR işlemlerinizi hızlandırın

COVID-19 için PCR işlemlerinizi hızlandırın

Yeni Korona Virüs SARS-CoV-2'nin (COVID-19) ortaya çıkışı ve dünya çapındaki salgın, COVID-19 için hasta örneklerini test eden laboratuvarlara olan ihtiyacı benzeri görülmemiş biçimde artırarak, bilim insanlarını giderek artan COVID-19 test örnekleri ve iş yüküyle karşı karşıya bıraktı. 
  • 25 Mar 2020

Devamı...

Kahvenizin içinde ne var

Kahvenizin içinde ne var?

Kahve içmek, sağlıkla ilgili bir dizi fayda ile ilişkilendirilmektedir fakat işleme yöntemleri, kahvenin biyoaktif bileşik profili ve antioksidan aktivitesini etkileyebilir. Yeni bir çalışma buhar uygulamasının kavrulmuş kusurlu kahve çekirdekleri üzerindeki etkilerini araştırıyor.
  • 13 Ara 2019

Devamı...

Hiçbir Paylaşımı Kaçırmayın



İletişim Formu