Mikrodalga Destekli Hidroliz ile Küçük Miktarlı (<50 mg) Gıda ve Yem Örneklerinde Amino Asit Analizi

Numunelerinizin amino asit tayininde yüksek kaliteyi ve hızlı örnek hazırlamayı garanti altına almak, Milestone ETHOS X sistemiyle artık çok daha kolay. ETHOS X, küçük miktarlardaki gıda ve yem örneklerinde güvenilir, tekrarlanabilir ve verimli bir hazırlık süreci sunarak analizlerinizin doğruluğunu artırır ve laboratuvar verimliliğini üst seviyeye taşır.

Özet

Bu Uygulama Yönteminde tanımlanan prosedür, gıda ve yem örneklerinde amino asitlerin belirlenmesi için bir yöntem sunmaktadır. Amino asitler oldukça hassas bileşikler olduğundan, bu analiz karmaşık bir süreç olabilir ve hedeflenen amino asitlere bağlı olarak farklı numune hazırlama yöntemleri kullanılmaktadır. Ancak tüm bu yöntemlerin ortak noktası, hidroliz adımıdır. Mikrodalga enerjisi ve kapalı kap teknolojisinin birleşimi, bu adımda numune hazırlama süresini önemli ölçüde kısaltmaktadır. Rotor tabanlı mikrodalga teknolojisi sayesinde Milestone ETHOS X sistemi, aynı anda 36 örneğe kadar işlem yapabilmekte ve böylece yüksek verimlilik, güvenilirlik ve üstün tekrarlanabilirlik sağlamaktadır.

Deney

Bu uygulama notunda, asit protein hidrolizi için bir yöntem bildirilmektedir.

Ekipmanlar

• Milestone ETHOS X

  • ATC sıcaklık kontrolü

• Vakum pompası (Milestone combiVAC)

• PHK05L veya PHK1L Protein hidroliz reaktörü:

  • 8, 25 veya 36 numunelik raf seçeneği

  • 8 ve 25’lik raflar için 3 mL kuvars vialler

  • 36’lık raflarda doğrudan kullanılabilen 1 mL HPLC cam vialler

• Azot gazı (4.7 veya daha yüksek saflık oranı)

Şekil 1 – Milestone’un ETHOS X ve PHK05L reaktörü

Numuneler ve Reaktifler

• Bu yöntem için kullanılabilecek maksimum numune miktarı 50 mg’dır.

• Numune kütlesine bağlı olarak kullanılacak reaktif hacimleri değişiklik gösterir.

• Asit hidrolizi için: 6 N HCl kullanılır.

Prosedürler

• Numuneyi doğrudan kuvars vial veya HPLC vial içerisine tartın.

• Reaktör kabını şu şekilde doldurun:

  • PHK05L için: 30 mL 6 N HCl

  • PHK1L için: 120 mL 6 N HCl

• Eğer HPLC vial kullanılıyorsa, kapakları çıkarın.

• Vialleri uygun PTFE raf ile birlikte reaktörün içine yerleştirin.

• Reaktörü kapatın ve azot tüpü ile vakum pompasına bağlı üç yollu vanayı açıp kapatarak reaktör içinde inert bir ortam oluşturun (daha fazla ayrıntı için PHK kullanıcı kılavuzuna bakınız).

• Met, Ser, Thr, Tyr, Phe ve Arg gibi ısıl olarak parçalanabilen amino asitlerin tayini için, Tablo 1’de tanımlanan mikrodalga programını çalıştırın.

• Tablo 2’deki yöntem, alifatik amino asitler arasındaki bağların tamamen parçalanması için tasarlanmıştır.

Adım	Süre (dakika)	Güç (W)	Sıcaklık (°C)
1	20	800	160

Tablo 2 – Alifatik amino asitler arasındaki bağları tamamen parçalamak için mikrodalga hidroliz yöntemi

• Soğutma işleminden sonra çözeltileri alın ve katı partikülleri uzaklaştırın.

• Hidrolizat, türevlendirme (derivatizasyon) adımı ve Gaz Kromatografisi (GC) veya Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC) ile analiz için hazırdır.

Kaynak: Milestone SRL